Contrôle microbiologique de la qualité de l'eau

La majorité des micro-organismes pathogènes proviennent de déjections humaines ou animales, comme il est techniquement impossible de faire l'analyse de tous les pathogènes, pour analyser la qualité microbiologique de l'eau on cherche des « micro-organismes indicateurs » de la contamination fécale, généralement inoffensifs, mais indiquant la présence de pathogènes issus des matières fécales. Deux indicateurs sont appropriés : E.coli et entérocoques intestinaux bien corrélés aux maladies gastro-intestinales.

Les coliformes comprennent traditionnellement un petit nombre d'espèces appartenant à la famille des Enterobacteriacea : Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Yersinia, Serratia. Ce sont des bacilles, Gram-, oxydase -, aéro-anaérobie facultatifs, fermentent le lactose avec production d'acide et de gaz et sont capables de se multiplier en présence de sels biliaires à 37°C (6).[1]

Le terme de « coliformes fécaux » sont des coliformes qui présentent les mêmes propriétés des coliformes après incubation à la température de 44°C/24h. E.coli appartient aux coliformes thermotolérants mais qui présente la particularité de produire l'indole à partir du tryptophane à 44 °C.

Deux techniques de recherche sont utilisées pour l'analyse microbiologique des eaux: la technique en milieu liquide et la technique en milieu solide

1-Techniques dénombrement en milieu liquide par détermination du Nombre le Plus Probable (NPP[2]) : Des dilutions successives de l'eau à analyser sont ensemencées à raison de 3 à 5 tubes de milieu de culture liquide. Après incubation, on dénombre dans chaque série le nombre de tube positif. La croissance se traduit par l'apparition d'un trouble du milieu et, éventuellement, une modification visible (virage d'un indicateur de pH coloré, production de gaz, trouble...). Le NPP[2] des  µog+[3]présents est estimés, à partir de réponses positives observées pour une ou plusieurs dilutions successives de la suspension bactérienne originelle. La table de Mac Grady donne le nombre le plus probable sur la dilution considérée.

2-Méthode par filtration : L'échantillon d'eau à analyser est filtré à travers une membrane (0,45µm) qui retient les micro-organismes recherchés. La membrane est ensuite placée sur une gélose. Durant l'incubation, des colonies se forment à la surface de la membrane. Pour le dénombrement, seule les boites contenant entre 30 et 300 colonies sont choisies. Cette technique permet de travailler sur des volumes importants d'échantillon et donc de concentrer les bactéries présentes en petit nombre sur un support de petite surface. Cette méthode permet une bonne différenciation des colonies, mais, elle n'est pas applicable aux eaux polluées (risque de colmatage). Le volume d'eau filtrée varie en fonction de la qualité de l'eau, pour les eaux de robinet le volume est généralement de 100 ml alors pour les eaux minérales naturelles, le volume filtré est de 250 ml.

Recherche et dénombrement des micro-organismes par la technique de la filtration sur menmbrane

Principaux examens révélant une pollution fécale de l'eau

a-Les streptocoques fécaux font partie du groupe streptocoque du groupe D et sont appelés aussi entérocoques. Ce sont des bactéries Gram positif, possédant l'antigène de groupe D, capables d'hydrolyser l'esculine en 2h à 44°C après repiquage sur milieu BEA[4] (Bile-Esculine-Azide). Ils témoignent d'une contamination d'origine fécale ancienne

b- Les bactéries sulfito-réductrices et de leurs spores, bactéries à Gram positif, anaérobies sporogènes (forme de résistance), capables de réduire les sulfites en sulfure, l'espèce la plus importante est Clostridium perfringens.

c-Recherche des germes pathogènes :

*Recherche des salmonella, ce sont des bactéries Gram négatif, elles se retrouvent fréquemment dans les milieux aquatiques pollués.

*Recherche des staphylocoques coques Gram positif, Seront considérées comme staphylocoques pathogènes si coagulase positive.

*Recherche des Vibrio cholerae (cas d'épidémie), ce sont des bacilles à gram négatifs, oxydase et catalase (+), aérobie anaérobies facultatifs, mobiles.

*Recherche des Pseudomonas aeruginosa, bacille à gram négatif, non sporulé, aérobie strict, très mobile grâce à un cil polaire.

Le contrôle microbiologique d'une eau consiste à rechercher les germes pathogènes qu'elle pourrait contenir, les germes recherchés, les méthodes, les milieux, les températures et les durées d'incubation sont résumés dans le tableau suivant.

Analyse microbiologique de la qualité de l'eau