Théorie et principe
Définition :
La chromatographie d'exclusion stérique (CES) aussi appelée chromatographie par permutation de gel est la technique de séparation par chromatographie liquide de macromolécules selon leur taille. Elle consiste sur l'utilisation d'une phase stationnaire qui peut être soit constituée d'un réseau tridimensionnel organique ou un support inorganique (silice).
Fondamental :
Le principe de fonctionnement de la chromatographie d'exclusion stérique repose sur l'injection d'une phase mobile liquide en tête de colonne en même temps que la solution de polymère. Par l'action d'une pompe, le solvant passe à travers la colonne à une vitesse d'écoulement constante, engendrant un gradient de pression au sein de la colonne. Sous l'effet de la pression, les macromolécules constitutives de l'échantillon passent également à travers la colonne qui est, elle, remplie d'un matériau caractérisé par une distribution de pores et se présentant sous la forme de billes de polymère réticulé.
![]() Représentation de la colonne de CES | Représentation de la colonne de CES avec V0 : Volume mort de solvant, Vb : Volume poreux rempli de solvant, Vmat : Volume de la matrice de gel |
En traversant une phase stationnaire, les macromolécules parcourent un chemin plus ou moins long selon leur aptitude à pénétrer dans les pores pendant leur parcours. La distribution de taille des pores sert ainsi à révéler celle des macromolécules, les plus petites d'entre elles ayant accès aux pores de toutes tailles. Quant aux macromolécules les plus grosses, leur volume peut les empêcher de pénétrer dans tel ou tel pore voire les maintenir dans le volume interstitiel ou d'exclusion V0 de la colonne.