Mode opératoire
1. Préparation de l'extrait
Les extraits préparés au cours du TP04, ont fait l'objet du criblage phytochimique des métabolites.
Rappel :
Les extraits ont été préparés par les trois méthodes macération, décoction et infusion.
2. Criblage phytochimique
Flavonoïdes
1mL de l'extrait est mélangé avec 1mL d'acide chlorhydrique (37%) et quelques copeaux de tournures de Magnésium.
L'apparition d'une coloration rouge, orange ou rose indique la présence de flavonoïdes.
Attention :
Cette réaction est exergonique
Tanins
0,5 mL de chlorure ferrique FeCl3 (1%) est ajouté à 2 mL de l'extrait, après incubation pendant 15 min à température ambiante le développement d'une coloration verte caractérise les tanins catéchiques, tandis que la couleur bleu-noirâtre indique la présence des tanins galliques.
Alcaloïdes
La présence des alcaloïdes dans les extraits est révélée par deux réactifs, le réactif de Mayer et le réactif de Wagner. 0,5 mL de chaque extrait est mélangé avec 5 mL de l'acide chlorhydrique (1%) ; la solution obtenue est divisé en deux volumes égaux dont le premier est traité par 0,5 mL du réactif de Mayer et le second par 0,5 mL du réactif de Wagner.
La formation d'un précipité blanc ou brun respectivement révèle la présence des alcaloïdes.
Méthode :
• Réactif de Wagner : 2g de KI et 1.27g de I2 dans 75ml d'eau distillée, le volume est ajusté à 100ml.
• Réactif de Mayer : 1.358 g d'HgCl2 dans 60ml d'eau distillée puis 5g de KI dans 10ml d'eau distillée. Mélanger les deux solutions et ajuster le volume total à 100 ml.
Terpénoïdes
5 mL d'extrait est mélangé avec 2 mL de Chloroforme et 3 mL d'acide sulfurique concentré. La formation de deux phases et une couleur marron à l'interphase indique la présence de terpénoïdes
Saponoside
Test de mousse : dans un tube à essai, 10 mL de l'extrait est agité pendant 15 secondes.
Après 15 min, une mousse persistante supérieur à 1cm indique la présence de saponosides.
Sucres réducteurs
1mL d'extrait est mélangé avec 2mL du réactif de la liqueur de Fehling (1mL de la solution A + 1mL de la solution B), après incubation de 8min dans un bain-marie bouillant, l'apparition d'un précipité rouge brique indique la présence des composés réducteurs.